Исследование молекулярных и клеточных механизмов естественного (врожденного) иммунитета с использованием бактериальных люминесцирующих тест-систем
Соглашение № 11-04-97064 р_поволжье_а от 17.05.2012
Руководитель — д.м.н., профессор Дерябин Д.Г.
Проект направлен на решение фундаментальной научной проблемы, связанной с изучением механизмов функционирования иммунной системы с позиций современной молекулярной и клеточной биологии. При этом в зависимости от оцениваемого механизма и типа бактериального биосенсора результатом исследования являлась регистрация динамики и выраженности бактерицидного эффекта, либо оценка уровня экспрессии стрессовых генов, характеризующих интенсивность и специфичность оказываемого воздействия.
При проведении работ 1 этапа проекта создана серия люминесцирующих микроорганизмов с различным строением поверхностных клеточных структур, конститутивно экспрессирующих идентичную кассету luxAB генов природного морского люминесцирующего микроорганизма Photobacterium leiognathi. С использованием созданных бактериальных биотестов охарактеризованы зависимости люминесцентного отклика при воздействии молекулярных факторов естественного иммунитета. Констатировано существование двух различных и, в известной степени, альтернативных бактерицидных систем, определяющих выраженность ингибирующего эффекта сыворотки крови на уровень свечения E. coli lux+ и B. subtilis lux+ и связанных с преимущественной активностью системы комплемента и лизоцима в отношении грамотрицательных, а бета-лизина (тромбоцитарного катионного белка) в отношении грамположительных микроорганизмов.
При проведении работ 2 этапа проекта создана панель репортерных люминесцирующих микроорганизмов, особенностью которых явилось клонирование кассет lux-генов под промоторами генов стрессового ответа, экспрессируемых только при наличии специфического повреждающего воздействия. В частности, на основе хозяйских штаммов Escherichia coli и Salmonella typhimurium созданы индуцируемые тест-системы soxS::lux и katG::lux, ориентированные на выявление окислительного стресса, связанного с воздействием на микробные клетки супероксид аниона и перекиси водорода. При использовании данных тест-систем в качестве объекта фагоцитоза проведена сравнительная оценка кислородзависимых бактерицидных систем нейтрофилов и макрофагов.
Полученные результаты явились экспериментальным обоснованием для разработки оригинальной биолюминесцентной технологии оценки входящих в систему неспецифического врожденного иммунитета гуморальных и клеточных бактерицидных систем человека и животных, основу которой составила панель оригинальных люминесцирующих штаммов, особенности строения поверхностных структур которых позволили относительно специфично оценивать состоятельность определенной молекулярной системы, а генетическая организация сформировала возможность чувствительной и специфичной характеристики окислительного метаболизма фагоцитов.
Последнее обновление: 27.03.2013
Ответственный за информацию:
Лисицкий Иван Иванович, помощник проректора по научной работе
(тел.91-22-07)
